Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展快速的过程中逐渐扩展

从第一次注意到家兔自身特异性到注意到1DF心血管疾病诊断病因的成果数万人在幼儿初期就有很好的揭示，多个家兔自身特异性中性的幼儿之前有70%在胰岛素类比后10短期内复发心血管疾病，而随访15年的幼儿这一%-减少到84%。相比之下之下，占诊断1DF心血管疾病一半以上的DF1DF心血管疾病的发作组态还没有人得不到适当的研究成果。

更为多的人开始可用分期子系统来并不一定1DF心血管疾病的成果：个体在注意到多种家兔自身特异性时转入第1期中，注意到浓度异常时转入第2期中，注意到病因时转入第3期中。一些多发家兔自身特异性中性的个体，在1期和2期，成果更是快，并持续发展为发作的1DF心血管疾病。我们之前揭示了一分组在首次监测到多种家兔自身特异性检查后至少10年无心血管疾病的更是快成果者，这分组病患人数少，但特征非常明确。随后，我们发现家兔自身淋巴巨噬细胞特异性CD8+T巨噬细胞催化在成果较快的病患之前基本上不存在，但在最近发作和长年存在的心血管疾病病患之前很不易监测到。这可能证明，与成果病患相比之下，这些病患化脓性催化的恒定增强。

早期研究成果证明，尽管恒定性T巨噬细胞(Treg)数量出现异常，但心血管疾病病患存在一些新功能缺陷，其之前之外对IL-2的催化能力也减缓。此外，心血管疾病病患之前的振荡CD4+T巨噬细胞可能对恒定更是具抵抗性，表现为振荡T巨噬细胞的抑制作用弱化，自然激发的Treg和活体激发的诱导Treg，以及淋巴巨噬细胞亲身经历的CD4+T巨噬细胞之前IL-2催化弱化。本研究成果的目的是揭示了CD4+恒定性T巨噬细胞(Treg)在一小群想像中较快成果者之前的特征，他们的平均成年为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究成果是一项以老年人基础上的纵向研究成果，在21岁表列出确诊的病患亲属之前检查1DF心血管疾病的危险因素。我们之前揭示了长年较快成果者的特征，他们保持多重家兔自身特异性中性大约10年，但没有人注意到心血管疾病的诊断病因，更慢性或非顺利完成性化脓性。随后，10名继续保持无心血管疾病并愿意发放大量血液检查的较快成果者划入T和B巨噬细胞新功能分析。在目前的研究成果之前，8名更慢成果者(SP分组)，之前位成年43岁(31-72岁)，18 - 32岁二者之间的家兔自身特异性中性。所有的行动者都所处1DF心血管疾病成果的1期，尽管一些人随后无法高度集中了家兔自身特异性对某些淋巴巨噬细胞的中性催化，然而，一名病患已经所处2期至少6年，但没有人注意到诊断病因，一名病患被病症为心血管疾病，该受试者72岁，在搜集实验检查时，其HbA1c急剧下降到53 mmol/mol(7%)，在数据分析之前对该NADP顺利完成了单独分析报告。剥离外周血单个核巨噬细胞(PBMCs)，采用多数值流式巨噬细胞忍术和T巨噬细胞抑制作用试验分析报告NADP之前Treg的频数万人、表DF和新功能。可用FlowSOM和CITRUS(聚类深入研究、表征和回归)顺利完成无监督聚类分析，分析报告Treg表DF。

结果：与肥胖症NADP相比之下，来自更慢成果体的失忆CD4+T巨噬细胞的监督聚类推测，激光阴的失忆CD4+ Treg频数万人减少，与糖皮质激素诱导的TNFR方面复合物(GITR)表述减少有关。一名HbA1c急剧下降的病患与成果较快者和意味着的准确数万人相比之下，Treg明人相同。新功能分析证明，与肥胖症NADP相比之下，来自较快成果体的Treg内皮细胞的CD4+振荡T巨噬细胞抑制作用明显损坏。表现为对振荡CD4+T巨噬细胞CD25和CD134表述的抑制作用减少。

绘出1 深入的表DF分析推测，CD4+Treg亚DF在更慢成果链表之前减少。由FlowSOM分解成的Treg二楼，群聚在来自所有NADP的光阴CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据标识物表述深入研究出10个元簇:失忆T巨噬细胞_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;失忆T cell_4;CD49b失忆T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +失忆T巨噬细胞;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)可用9个不同Treg标识分解成的10个元簇的MST。每个结点代表者一个坦克部队(100个坦克部队)，更是大的元坦克部队(10个元坦克部队)在结点分组外面上色。每个结点之前的碗绘出声称单个标识的表述级别。(b)每个元聚类的热绘出，以推测整体标识表述。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)分解成绘出，以及FlowSOM比对的每个元簇的覆盖层。(e-l)相比之下之下金属量为每个metacluster盒该线绘出(金属量> 0.05%)确定为HD和SP分组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +失忆T巨噬细胞(h)、失忆T cell_1(i),失忆T cell_2 (j),失忆T cell_3 (k) n d CD49b失忆T巨噬细胞(l)。绿色格姪代表者**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon相加符号秩检查。此键适用于绘出形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

绘出2 可用CITRUS的预测模DF证实，Treg频数万人的减少是成果较快的徽标。分级方面联(a - f)和棉花分析(g-k)更是为SP行动者和意味着的HD行动者在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的差异。(a)特异性CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社群的代表者性绘出。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3硫化物，然后通过HLA-DR和GITR表述顺利完成剥离，模拟FlowSOM社群。(b) HD(黑点)和SP(杂色)分组以及NADPSP 606(绿色)之前CD25+ cd127的频数万人统计绘出。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+方面联姪集的盒该线绘出;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)柑桔簇折叠由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述强度著色，斜该线突出的簇被比对为SP和HD链表二者之间的不同。(j)盒该线绘出推测了在SP(杂色)和HD(灰点)分组之前，CITRUS失忆Treg_3和Treg_4的相比之下之下金属量(%-)。(k)直方绘出推测每个簇的表DF(粉红色)和Treg标识相比之下之下表述与故事情节表述(深蓝色);上列，闪存Treg_3;下面一行，闪存Treg_4。故事情节与所有其他簇之前标识的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon相加符号秩检查

绘出3 与肥胖症献血者相比之下，成果较快者失忆treg的GITR减少。每个失忆CD4+T巨噬细胞元簇(失忆T巨噬细胞_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;CD49b +失忆T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +失忆T巨噬细胞;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)监测每个表述标识的波动。(a,b)来自HD (a)和S (b)链表的表述热绘出(sp606不之外在内)。(c,d)失忆Treg_4元簇之前所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(绿色)的FlowSOM GITR表述串联，推测直方绘出(c)和统计绘出(d)。Wilcoxon相加符号秩和检查，p< 0.07(绿色)所有NADP之外，p< 0.05(深蓝色)NADPSP 606和意味着的HD不之外在测试之前。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之前GITR表述，从分级方面联，从所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(绿色)串联，推测直方绘出(e)和统计绘出(f) *p< 0.05, Wilcoxon相加符号秩检查

绘出4 来自较快成果的CD4+ treg巨噬细胞高度集中振荡CD4+T巨噬细胞的能力也减缓。SP分组用深蓝色的该线和格姪声称，HD分组用紫色的该线和格姪声称，绿色的该线/格姪声称NADPsp606。可用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞顺利完成分选。CD4+CD25−(此番者)被标识为CFSE, Treg按捕捉到的%-指示剂。用抗CD3 /28微珠光阴化巨噬细胞，培育出3同月顺利完成流式巨噬细胞忍术监测。(a-d)与CD4+此番者相比之下之下应的treg培育出(暂时性)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD此番者培育出。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑制作用总和(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用总和。可用中性对照(激光阴的响应巨噬细胞下同treg)推算抑制作用总和。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重更是为测试

绘出5 振荡CD4+T巨噬细胞对较快成果的T巨噬细胞光阴化的抑制作用更是敏感。SP分组用深蓝色的该线和格姪声称，HD分组用紫色的该线和格姪声称，绿色的该线/格姪声称NADPsp606。可用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞顺利完成分选。CD4+CD25−(此番者)被cfsel标识，treg按捕捉到的%-指示剂。用抗CD3 /28微珠光阴化巨噬细胞，培育出3同月顺利完成流式巨噬细胞忍术(CD25反染)和巨噬细胞因姪分析。HD Treg与HD、SP或sp606此番者共同培育出。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑制作用百分数万人(b)。(c,d) CD25抑制作用百分数万人(c)和CD134抑制作用百分数万人(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育出之前的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重更是为测试

结论：我们得出的结论是，来自较快成果姪的光阴化失忆CD4+Treg在GITR表述之前得不到了扩展和非常丰富，凸显了全面研究成果Treg在1DF心血管疾病风险个体之前的异质性的实质。

出处出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28