Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病病症进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次用到肾脏自身HIV到用到1改型心血管疾病药理学腹泻的十分困难领军在老年人时期就有很差的叙述，多个肾脏自身HIV感染性的老年人；还有70%在血清转换成后10年内患上心血管疾病，而随访15年的老年人这一比领军增高到84%。远比之下，占药理学1改型心血管疾病一半以上的改型1改型心血管疾病的患病机制还没有获取充分的研究者。

更为多的人开始用于分期系统来判别1改型心血管疾病的十分困难：个躯在用到多种肾脏自身HIV时进入第1收尾，用到血糖异常时进入第2收尾，用到腹泻时进入第3收尾。一些多发肾脏自身HIV感染性的个躯，在1期和2期，十分困难很慢，并发展为患病的1改型心血管疾病。我们以前叙述了一第三组在首次扫描到多种肾脏自身HIV比对后多于10年无心血管疾病的更慢十分困难者，这第三组患儿人数少，但相似性更为指明。随后，我们挖掘借助于肾脏自身上皮细胞特异性CD8+T亚基质质子化在十分困难较快的患儿里基本不依赖于，但在未来会患病和近十年依赖于的心血管疾病患儿里很更容易扫描到。这可能说明了，与十分困难患儿远比，这些患儿自身免疫质子化的调节增强。

早期研究者说明了，尽管调节性T亚基质(Treg)存量正常，但心血管疾病患儿依赖于一些功能性缺陷，其里之外对IL-2的质子化意志力增加。此外，心血管疾病患儿里的波动CD4+T亚基质可能对调节不具抵抗性，观感为波动T亚基质的诱发减慢，自然激发的Treg和躯外激发的诱导Treg，以及上皮细胞经历的CD4+T亚基质里IL-2质子化减慢。本研究者的目的是叙述了CD4+调节性T亚基质(Treg)在海岸边极较快十分困难者里的相似性，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访星期为18-32年。

原理：BOX研究者是一项以许多人为基础的主干研究者，在21岁此表确诊的患儿亲属里检查1改型心血管疾病的险恶因素。我们以前叙述了近十年较快十分困难者的相似性，他们始终保持多重肾脏自身HIV感染性至少10年，但没有用到心血管疾病的药理学腹泻，慢性或非开展性自身免疫。随后，10名继续始终保持无心血管疾病并愿意提供大量血清比对的较快十分困难者纳入T和B亚基质功能性数据分析。在目前的研究者里，8名慢十分困难者(SP第三组)，里位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁相互间的肾脏自身HIV感染性。所有的自发性都西北面1改型心血管疾病十分困难的1期，尽管一些人随后失去了肾脏自身HIV对某些上皮细胞的感染性质子化，然而，一名患儿已经西北面2期多于6年，但没有用到药理学腹泻，一名患儿被诊断为心血管疾病，该病患72岁，在捕获科学实验比对时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据数据分析里对该NADP开展了单独指标。分立外周血单个核能亚基质(PBMCs)，采用多给定流式亚基质练成和T亚基质诱发试验指标NADP里Treg的基频、表改型和功能性。用于FlowSOM和CITRUS(聚类比对、表征和紧接著)开展无指导聚类数据分析，指标Treg表改型。

结果：与身躯健康NADP远比，来自慢十分困难躯的梦境CD4+T亚基质的指导聚类推测，作用于的梦境CD4+ Treg基频增高，与糖皮质激素诱导的TNFR相关亚基(GITR)表示增高有关。一名HbA1c升高的患儿与十分困难较快者和归一化的对照第三组远比，Treg谱相同。功能性新挖掘借助于，与身躯健康NADP远比，来自较快十分困难躯的Treg介导的CD4+波动T亚基质诱发值得注意损毁。观感为对波动CD4+T亚基质CD25和CD134表示的诱发增高。

上图1 全面性的表改型数据分析推测，CD4+Treg亚改型在慢十分困难数据流里增高。由FlowSOM作用于的Treg室，挤满在来自所有NADP的活CD4+CD45RA -亚基质上。根据标示物表示比对借助于10个元簇:梦境T亚基质_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T亚基质;HLA-DR + GITR +梦境T亚基质;内核Treg_1;内核Treg_2;内核Treg_3;和内核Treg_4。(a)用于9个并不相同Treg标示作用于的10个元簇的MST。每个结点都有一个协同(100个协同)，较小的元协同(10个元协同)在结点第三组周遭上色。每个结点里的糕上图暗示单个标示的表示级别。(b)每个元聚类的热上图，以推测整躯标示表示。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)作用于上图，以及FlowSOM鉴别的每个元簇的覆盖层。(e-l)比起数量级为每个metacluster木箱终点站上图(数量级> 0.05%)确定为HD和SP第三组:内核Treg_2 (e),内核Treg_3 (f),内核Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T亚基质(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T亚基质(l)。红色白点都有**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检查和。此键适用于上图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

上图2 用于CITRUS的预测模改型证实，Treg基频的增高是十分困难较快的标志。基准门控(a - f)和柑橘数据分析(g-k)来得SP自发性和归一化的HD自发性在CD4+CD45RA−T亚基质上的区别。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会阶层的指标性上图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3钼，然后通过HLA-DR和GITR表示开展分立，模拟FlowSOM社会阶层。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)第三组以及NADPSP 606(红色)里CD25+ cd127的基频简介上图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控有界的木箱终点站上图;(c) HLA-DRloGITR−(内核Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内核Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内核Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内核T cell)。(g - i)油菜簇旋转由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表示强度着色，箭头突借助于的簇被鉴别为SP和HD数据流相互间的并不相同。(j)木箱终点站上图推测了在SP(蓝点)和HD(灰点)第三组里，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的比起数量级(比领军)。(k)直方上图推测每个簇的表改型(粉红色)和Treg标示比起表示与时代背景表示(蓝色);上列，内核Treg_3;下面一行，内核Treg_4。时代背景与所有其他簇里标示的表示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检查和

上图3 与身躯健康献血者远比，十分困难较快者梦境treg的GITR增高。每个梦境CD4+T亚基质元簇(梦境T亚基质_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T亚基质;HLA-DR + GITR +梦境T亚基质;内核Treg_2;内核Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)扫描每个表示标示的推移。(a,b)来自HD (a)和S (b)数据流的表示热上图(sp606不之外在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇里所有HD(粉红色)、所有SP(蓝色)和SP 606(红色)的FlowSOM GITR表示串接，推测直方上图(c)和简介上图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检查和，p< 0.07(红色)所有NADP之外，p< 0.05(蓝色)NADPSP 606和归一化的HD不之外在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR表示，从基准门控，从所有HD(粉红色)、所有SP(蓝色)和SP 606(红色)串接，推测直方上图(e)和简介上图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检查和

上图4 来自较快十分困难的CD4+ treg亚基质控制波动CD4+T亚基质的意志力增加。SP第三组用蓝色的终点站和白点暗示，HD第三组用黑色的终点站和白点暗示，红色的终点站/白点暗示NADPsp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T亚基质开展分选。CD4+CD25−(需要的话者)被标示为CFSE, Treg按观察的比领军校准。用抗CD3 /28微珠增殖亚基质，培养借助于来3天后开展流式亚基质练成扫描。(a-d)与CD4+需要的话者比起应当的treg培养借助于来(骨髓)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者培养借助于来。(a,b,f) CFSE凋亡(a,e)和CFSE诱发比领军(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发比领军。用于感染性对照(作用于的第三组织起来亚基质不含treg)推算诱发比领军。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重来得测试

上图5 波动CD4+T亚基质对较快十分困难的T亚基质增殖的诱发更加敏感。SP第三组用蓝色的终点站和白点暗示，HD第三组用黑色的终点站和白点暗示，红色的终点站/白点暗示NADPsp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T亚基质开展分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel标示，treg按观察的比领军校准。用抗CD3 /28微珠增殖亚基质，培养借助于来3天后开展流式亚基质练成(CD25反染)和亚基质因次子数据分析。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者共同培养借助于来。(a,b) CFSE凋亡(a)和CFSE诱发调升(b)。(c,d) CD25诱发调升(c)和CD134诱发调升(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养借助于来里的表示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重来得测试

论点：我们推论的论点是，来自较快十分困难次子的增殖梦境CD4+Treg在GITR表示里获取了引入和丰富，凸显了进一步研究者Treg在1改型心血管疾病可能性个躯里的异质性的重要性。

原文典故：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28